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為什么我的測(cè)序結(jié)果方向是反的？

原因一：這可能是因?yàn)槟跇?gòu)建載體的時(shí)候插入片段是非定向的，這種情況一般在T/A克隆的時(shí)候比較常見。

DNA測(cè)序樣品可以用TE溶液進(jìn)行溶解嗎？

TE溶液中的EDTA對(duì)PCR反應(yīng)有一定的抑制作用，實(shí)際上DNA測(cè)序是在PCR反應(yīng)過程中進(jìn)行的，想要得到一個(gè)理想的測(cè)序結(jié)果，首先需要一個(gè)最佳的PCR反應(yīng)條件。因此，在準(zhǔn)備DNA測(cè)序樣品時(shí)，建議您使用滅菌水進(jìn)行溶解。

測(cè)序結(jié)果里面為什么找不到我添加的酶切位點(diǎn)？

測(cè)序結(jié)果開始一段序列信號(hào)雜亂，不易辨認(rèn)是什么原因？

這是因?yàn)轶w系中殘存的染料單體干擾測(cè)序反應(yīng)形成的雙峰所致；此外，測(cè)序初始階段電壓不穩(wěn)定，導(dǎo)致引物后面有20-50bp的堿基讀不清楚。

我應(yīng)該送什么形式的樣品？

pcr產(chǎn)物：如果以PCR產(chǎn)物的形式送樣，建議將PCR產(chǎn)物切膠回收后再送測(cè)序，這樣可以在一定程度上避免重疊峰的出現(xiàn)。